用途:

用于体外分离外周淋巴细胞,也可以从其他来源中分离单核细胞,包括脐带血细胞和骨髓细胞。

方法概述:

分离混合血液白细胞早期的方法,总是伴随红细胞聚集,只轻微影响白细胞。通过离心,红细胞密度增加聚集,同时可以从离心管上部收集白细胞。

Boyum提出了一种更方便,通过使用Ficoll甲泛影钠溶液离心快速分离方法。稀释的血液在Ficoll甲泛影钠溶液中分层,低速短时离心。红细胞和沉降到管底的粒细胞,和单个核细胞(淋巴细胞)和血小板可以从两个分层之间收集。

许多研究者不断努力,修订了Boyum方法,MP生物医学公司生产的LSM,方法的独特之处是运用泛影钠成功的代替了甲泛影钠。

程序原理:

除去血液中的纤维蛋白或肝素处理血液以1:1的比例用生理盐水或平衡盐溶液稀释,在分离溶液中分层,低速离心30分钟。通过离心,迁移能力不同最终形成不同的细胞层。

大部分的红细胞和粒细胞通过梯度迁移形成颗粒状。由于其密度不同,淋巴细胞和其他单个核细胞(单核细胞和血小板)分布在血浆和LSM两层中间。淋巴细胞可以通过回抽分层回收,在进一步去除血小板,LSM和血浆。

试剂:

LSM是一种灭菌过滤溶液,每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克钠胺。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃

使用说明:

以下的操作步骤是最初由Boyum设计的程序的众多改良版本中的一种。此程序的改良是通过运用除去血液中的纤维蛋白或搞凝血剂处理人体血液,这种改良对于其他物种来源血液或者其他组织非常有必要。

1.轻轻颠倒瓶子使LSM充分混合

2.无菌转移3mlLSM到15ml离心管中

3.混合2ml除纤维蛋白血液或肝素处理血液和2ml生理盐水

4.仔细的将稀释血液加入3mlLSM(室温)于15ml离心管中,在血液和LSM中形成一个明显的分层。不要将稀释血液混合入LSM中

5.室温下400g离心15-30分钟,离心可以沉淀红细胞和多核白细胞同时可以再LSM上形成一层单核淋巴细胞。

6.吸出淋巴细胞上方2-3mm的血浆

7.吸取淋巴细胞层以及它下面一半的LSM和转移到另外的一个离心管。加入等体积的平衡盐缓冲液至淋巴细胞离心管中,室温离心10分钟,离心速度设定在既不损伤细胞又能沉淀细胞即刻,例如160-260×一(去除LSM和降低血小板的百分比)

8.用平衡盐缓冲液清洗细胞,用适当的培养基重悬细胞。

订购信息:

货号 品名 规格

0850494X LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM l00ml

0850494 LYMPHOCYTE SEPARATION MEDIUM 5x100 ml

厂家说明:

MP Biomedicals生物医学公司是位于美国加利福尼亚州的知名生命科学和生物技术厂商。2004年底成功收购Qbiogene、ICN,现在全球有5个大型仓库,能够及时供应各行业需求,亚洲仓库位于新加坡。它致力于生命科学领域的基础研究和探索。目前它提供55000多种产品,是世界上能全面提供生命科学产品和临床诊断产品的几家厂商之一。